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ISSN : 1225-4339(Print)
ISSN : 2287-4992(Online)
The Korean Journal of Food And Nutrition Vol.25 No.4 pp.755-761
DOI : https://doi.org/10.9799/ksfan.2012.25.4.755

산삼 배양근에서 분리한 다당의 면역자극 활성에 미치는 효과

남소현, 이영경, 홍희도, 이영철, 김영찬, 신광순*, 조장원
한국식품연구원,*경기대학교 식품생물공학과

Immuno-Modulatory Activity of the Crude Polysaccharide from Wild Ginseng Adventitious Root

Chang-Won Cho, Sohyun Nam, Young Kyoung Rhee, Hee-Do Hong, Young-Chul Lee, Young-Chan Kim, Kwang-Soon Shin*
Korea Food Research Institute, Seongnam 463-746, Korea
*Dept. of Food Science and Biotechnology, Kyonggi University, Suwon 443-760, Korea

Abstract

In this study, we examined immuno-modulatory activities of crude polysaccharides from wild ginseng adventitious roots (WGAR). The crude polysaccharide (WGAR-CP) was isolated from WGAR by hot water extraction, ethanol precipitation, and dialysis. The major constituents in WGAR-CP were neutral sugar (64.77%), and uronic acid (34.32%). WGAR-CP demonstrated anti-complementary activity dose-dependently. The immuno-modulatory effects of WGAR-CP were also analyzed by measuring nitric oxide and cytokines in the supernatants of mouse peritoneal macrophages. Mouse peritoneal macrophages stimulated with WGAR-CP produced nitric oxide and various cytokines such as interleukin (IL)-6 and IL-12 in a dosedependent manner. In conclusion, WGAR-CP may have immuno-modulatory activities by activating a complementary system and macrophages, which produces cytokines.

08_25-4-05.pdf863.7KB

서 론

산삼은 야생(특히 산)에서 자연발생적으로 발아하여 성장한 삼을 말한다. 일반적으로 약효 면에서 인삼보다는 장뇌삼이, 장뇌삼보다는 산삼이 강한 것으로 알려져 있으며, 민간이나 임상에서 질병 치료에 활용되고 있다. 하지만 산삼은 시중에서 구하기가 어렵고, 고가의 가격 때문에 산업적으로 응용하기에는 어려움이 따른다. 최근 실험실에서 산삼의 배양근을 재배하는 기술이 개발되어 많은 연구가 진행 중이다. 산삼 배양근은 천연 야생 산삼으로부터 조직을 분리하여 세포괴(cellus)와 부정근을 단계별로 유도하고, 이들 뿌리 중에서 건실한 것을 선별한 후, 생물반응기를 이용하여 45~60일 가량 배양하여 생산되고 있다(Son 등 1999). 이렇게 생산된 산삼 배양근은 야생 산삼과 매우 유사한 성분을 함유하고, 대체로 인삼보다 사포닌 함량이 높고, 인삼에서는 볼 수 없는 다양한 약리성분을 함유하고 있다고 보고되었다(Jeong 등 2005). 또 면역활성 증강(Kwon 등 2004) 및 당뇨병 개선 효과(Kim 등 2012), 항산화 효과(Kim 등 2010) 등이 보고된 바 있으나, 산삼 배양근에서 유래된 다당체의 활성 효과에 대한 연구는 미미한 실정이다.

식물체로부터 유래된 다당체(polysaccharides)는 면역증강 인자로 잘 알려져 있으며, 인삼에서 정제된 다당체는 tumor necrosis factor(TNF)-α, interleukin(IL)-1, IL-2, IL-6, IL-12, interferon(IFN)-γ 및 granulocyte-macrophage colony-stimulating factor(GM-CSF)와 같은 다양한 cytokine들의 생산과 림프계 세포가 증식하도록 자극하는 강력한 면역조절 기능도 가지고 있다(Lee 등 1997; Kim 등 1998; Shin 등 2002; Song 등 2003).

최근 많은 연구들이 질병이 발생한 이후가 아니라, 이에 대처한 예방 전략의 개발이 장기적으로 건강 유지라는 측면에서 보다 효과적이며 유익하다고 제안하고 있다(Shin KS 2012). 따라서 인체의 면역계를 활성화 시킬 수 있는 새로운 면역증 강제의 개발은 기존의 병원체에 효과적으로 대처할 수 있는 방법으로 중요시 되고 있다.

인삼에서 분리된 다당체가 강력한 면역자극활성이 있다는 이전 연구들을 고려해 보았을 때, 산삼 배양근 다당체 역시 면역자극활성이 있을 것으로 추론되었다. 따라서 본 연구에서는 산삼 배양근의 다당체를 분리하여, 성분분석 및 각종 면역자극 활성 특히 자연면역계를 구성하고 있는 보체계 및 macrophage에 대한 영향을 평가함으로써, 면역자극활성제로서의 산삼 배양근 다당체의 가능성을 살펴보았다.

재료 및 방법

1. 산삼 배양근 시료 및 조다당 분리

본 연구에서 사용된 산삼 배양근은 ㈜바이오벨류(Jeju, Korea)에서 제공받은 것을 사용하였다. 산삼 배양근을 1 ㎝ 이하로 절단하여 환류추출기에 10배의 D.W.와 함께 넣은 뒤 90℃에서 3시간 동안 가열하여 나온 추출액을 4℃로 조절된 원심분리기(Mega 17R, Hanil Science Industrial Co. Ltd., Inchun, Korea)에서 분리하였다. 분리한 상등액은 최종농도가 80%가 되도록 ethanol을 첨가하여 하룻밤 방치한 후, 발생한 침전물을 회수하였다. 침전물을 소량의 증류수에 용해하여 Spectra/Por 투석막(MWCO; 6,000~8,000, Spectrrum Medical Industries Inc., Laguna Hills, CA, USA)을 이용하여 2~3일간 투석을 행하고 동결건조를 행하여 조다당 시료(WGAR-CP)를 얻었다.

2. 일반 성분 분석 방법

총 당 함량은 phenol-sulfuric acid법(Dubois 등 1956)으로 측정하였다. 즉, 시험관에 시료의 조다당체 분말을 1%(w/v)로 증류수에 녹인 시료용액을 0.45 ㎛ 막필터로 여과하여 여액을 각각 1 ㎖씩 취하여 5% phenol 1 ㎖에 잘 혼합시켰다. 여기에 황산 5 ㎖를 첨가한 후 30분 반응시키고, 490 ㎚에서 흡광도를 측정하여 검량선으로부터 구해진 glucose의 함량으로 총 당 함량을 계산하였다. 산성당 함량은 carbazole-sulfuric acid법(Bitter 등 1962)으로 측정하였다. 시료분말을 1%(w/v) 농도로 증류수에 용해한 시료용액을 0.45 ㎛ 막필터로 여과한 후 여액을 각각 0.5 ㎖씩 취하고, 0.125% carbazole 0.25 ㎖를 가하여 잘 혼합시켰다. 여기에 진한 황산 3 ㎖를 가하고, 85℃ water bath에서 15 min간 발색시킨 후 525 ㎚에서 흡광도를 측정하여 검량선으로 부터 구해진 β-D-galacturonic acid를 표준물질로 하여 함량을 계산하였다. 단백질 함량 측정은 Lowry method(Lowry 등 1951)으로 측정하였으며, 표준물질로는 BSA를 사용하였다.

3. 구성당 분석 방법

구성당 분석은 Albersheim 등의 방법(Thomas & Albersheim 1972)을 일부 변형하여 가수분해 후 각 구성당을 alditol acetate 와 aldonolactone로 유도체화 하였고, gas chromatography(GC ACME-6100, Young-Lin Co. Ltd. Anyang, Korea)를 이용하여 분석하였다. 다당 시료를 2 M trifluroacetic acid(TFA) 중에서 121℃, 1.5 hr 반응시켜 가수분해 후, 1 ㎖의 1 M NH4OH(ammonia solution)에 용해하여 10 ㎎의 NaBH4로 4 hr 환원시켰다. Acetic acid를 적당량 가하여 잔존 NaBH4를 제거한 후 methanol을 가하며, 반복 건조함으로써 과량으로 가해진 acetic acid를 제거하여 각 구성당에 상당하는 alditol로 전환하였다. 중성당의 구성을 알기 위해 각각의 alditiol을 1 ㎖의 acetic anhydride를 가하여 121℃에서 30 min 동안 반응시켜 alditol acetate로 전환시켰으며, 이를 chloroform/H2O 2상 용매계로 분리하여 추출하고, 추출물은 건조 후 소량의 acetone에 용해하여 GC 분석용 시료로 사용하였다. 또 산성당의 구성을 분석하기 위하여 전환된 alditol을 증류수에 녹인 뒤, Sep-pak QMA Cartridge(Waters, Milford, MA, USA)에 전개하고, 1 M HCl로 aldonic acid를 분리하였다. 분리한 용액에 2 M TFA를 가하여 100℃에서 5 min간 반응시켜 aldonolactone으로 전환시켰다. 그 후 chloroform/H2O 2상 용매계로 분리하여 추출하고, 건조하여 GC 분석 시료로 사용하였다. GC column은 SP-2380 capillary column(0.25 ㎜×30 m, 0.2 ㎛ film thickness, Supelco, Bellefonte, PA, USA)을, detector는 Flame ionization detector(FID, Young-Lin Co. Ltd.)를 사용하였고, carrier gas로서 N2를 1.5 ㎖/min으로 흘렸다. Injection 온도 250℃, detector 온도 270℃, 컬럼 온도는 60℃에서 220℃까지 30℃/min, 220℃에서 250℃까지 8℃/min의 조건하에서 실험하였다. 각 구성당의 mole%는 각 유도체의 peak 면적, 분자량 및 FID에 대한 molecular response factor를 각각 산출하여 계산하였다.

4. 항보체활성평가

항보체활성은 Mayer 방법(Kabat & Mayer 1965)을 이용하여 시료에 의한 보체소비(complement consumption) 후 잔존하는 보체에 의한 적혈구 용혈 정도에 근거를 둔 complement fixation test로 측정하였다. 즉, 여러 농도(250, 500, 1,000 ㎍/㎖)로 증류수에 녹인 시료에 정상인의 혈청과 GVB++(gelatin veronal buffered saline, pH 7.4, 2% gelatin, 500μM Ca2+, 2 mM Mg2+ 함유) 완충액을 각각 50 ㎕ 씩 혼합하여 37℃에서 30 min간 1차 반응시키고, GVB++를 350 ㎕를 가한 후 이를 10~160배로 연속 희석하였다. 여기에 다시 750 ㎕의 GVB++를 가한 후 양의 감작적혈구(IgM-sensitization sheep erythrocyte, EA Cell, 1×108 cells/㎖) 250 ㎕를 가해 37℃에서 60 min간 2차 반응시키고, PBS 2.5 ㎖를 넣어 반응을 정지시켰다. 반응액을 2,500 rpm에서 약 10 min간 원심분리하여 얻어진 상등액을 412 ㎚에서 흡광도를 측정하여 잔존 용혈 활성을 측정하였다. 다당체의 항보체 활성은 대조군의 총 보체용혈(50% total complement hemolysis, TCH50, %)에 대한 저지율(inhibition of 50% total complement hemolysis, ITCH50, %)로서 나타내었다.

5. 면역계 관련 세포에 대한 독성 측정

C57BL/6 mouse(웅성, 5주령, 한림)의 복강에 5% thioglycollate 배지(Sigma, St Louis, MO, USA)를 1 ㎖ 주입하고, 72~96 hr내에 유도된 macrophage를 PBS를 이용하여 회수하였다. 그 후 RPMI 1640 medium(GibcoTM, Grand Island, NY, USA)으로 2~3회 세척하고, 세포수를 2.5×106 cells/㎖로 조정하여 96-well plate에 배양하였다. 배지는 RPMI 1640에 10%(v/v) fetal bovine serum (FBS, GibcoTM)과 1%(v/v) penicillin-streptomycin을 가한 배지를 사용하였다. C57BL/6 mouse에서 비장을 적출하여 마쇄 및 여과를 거쳐 비장세포를 획득하였다. 이 후 0.2% 식염수를 이용하여 적혈구를 제거하고, RPMI 1640(with 10% FBS)로 2~3 회 세척하여 세포수를 2.5×106 cells/㎖가 되도록 조정하였다. 이때 얻어진 세포 부유액은 96 well plate에 100 ㎕씩 분주하였다. 다양한 농도로 희석된 시료를 100 ㎕씩 첨가하여 37℃, 5% CO2 incubator에서 72 hr 배양하였다. 각 세포에 대한 독성은 MTT assay 방법에 따라 측정하였다. 96 well-plate의 상등액을 조심스럽게 제거한 후, MTT 0.5 ㎎/㎖ [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide(MTT, Sigma)] 용액을 200 ㎕ 씩 첨가하여 4 hr 동안 배양하여 formazan을 형성시켰다. 그후, 상등액을 제거하고 DMSO 200 ㎕를 각 well에 첨가하여 formazan을 녹인 후 540 ㎚에서 흡광도를 측정하였다.

6. Nitric oxide 생산량 측정

활성화된 macrophage가 분비하는 것으로 알려진 nitric oxide (NO)의 생성량을 측정하였다. NO의 생성은 비색법으로 세포 상등액에 축적되는 nitrite양을 측정하였다. 100 ㎕의 세포배양 상층액을 취하여 동량의 Griess reagent(Sigma)을 가하여 상온에서 15 min 반응시켰다. NO의 활성 정도는 ELISA 판독기(Infinite M200 Pro, TECAN, Männedorf, Switzerland)를 사용하여 540 ㎚에서 측정하였다.

7. Cytokine 생산량 측정

배지로 희석시킨 고분자 분획물을 농도 별로 세포에 처리하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 24 hr 배양한 후, 상등액으로 분비된 IL-6, IL-12의 양을 ELISA kit(BD Biosciences, San Diego, CA, USA)을 이용하여 측정하였다. 즉, anti-cytokine capture antibody를 coating buffer(0.2 M sodium phosphate, pH 6.5)에 희석하여 96 well plate(NUNC Co., Roskilde, Denmark)에 100 ㎕/well 씩 넣은 후, 4℃에서 하룻밤 방치하여 coating하였다. Tween 20(Sigma)을 phosphate buffered saline(PBS)에 0.05% (v/v)가 되도록 가한 PBS/Tween 용액으로 plate를 3회 세척한다. Assay diluent(PBS with 10% FBS)를 plate에 200 ㎕/well 씩 넣은 후 상온에서 1시간 방치하였다. PBS/Tween으로 3회 세척 후, 배양 상등액을 각 well에 100 ㎕씩 넣어준 뒤 2시간 상온에서 방치하였다. PBS/Tween으로 5회 세척 후, detection antibody인 biotinylated antibody와 enzyme reagent인 stretavidin-horseradish peroxidase conjugate를 assay diluent(PBS with 10% FBS)에 희석하여 plate에 100 ㎕/well씩 넣은 후 상온에서 1 hr 방치하였다. PBS/Tween으로 7회 세척 후, substrate solution(TMB substrate reagent Set, BD Biosciences)를 100 ㎕/well 씩 넣은 후 암소에서 30 min 방치하였다. Stop solution인 2 M 황산용액을 well 당 50 ㎕ 씩 넣어 반응을 중지시키고, 96 well plate reader를 이용하여 450 ㎚에서 흡광도를 측정하였다.

8. 통계처리

실험에서 얻은 모든 data는 SAS(Statistical Analysis System 1996) 8.0 프로그램을 이용하여 ANOVA 분산분석과 Duncan의 다중범위 검정법으로 시행하였다.

결과 및 고찰

1. 산삼 배양근 유래 다당체의 화학적 특성

산삼 배양근으로부터 열수추출 및 ethanol 침전에 의해 분리한 산삼 배양근 다당체(WGAR-CP)의 일반 화학특성을 살펴본 결과는 Table 1과 같다. WGAR-CP는 중성당 64.77%, 산성당 34.32%로 구성되어 있었으며, 단백질은 0.91%로 미량 존재하였다. 한편, WGAR-CP를 가수분해하여 alditol acetate 유도체로 전환하고 구성당을 분석한 결과, glucose가 85.5%로 가장 높았으며, 그 외 rhamnose 2.9%, arabinose 5.4%, galactose 5.9%를 함유하고 있었다. 또 uronic acid는 galacturonic acid가 71.5%, glucuronic acid가 28.5%로 대부분 galacturonic acid로 밝혀졌다. 이는 Min 등(1984)이 인삼의 pectin을 구성하고 있는 성분을 galacturonic acid, glucose, galactose, arabinose, rhamnose 및 xylose로 밝힌 점과 비슷하였다. 또한 홍삼의 산성다당체 성분 구조를 동정한 연구(Lee & Okuda 1990; Okuda H 1992)에서 구성성분을 galacturonic acid, arabinose, rhamnose, glucose, galactose로 밝힌 것과도 유사하였다.

Table 1. Chemical properties of WGAR-CP

2. 산삼 배양근 유래 다당체의 보체계 활성화능

보체계(complement system)는 C1~C9의 활성단백질과 조절인자를 포함하여 약 20여 종의 혈중 순환 단백질들로 구성되어 있으며, 외부 감염 병원체 등 침입인자를 항체의 존재 또는 비존재 하에 비특이적으로 제거하는 생체의 주요 방어기구이다(Kwon & Sung 1997). 산삼 배양근 유래 다당에 의한 보체계 활성화능을 측정한 결과, WGAR-CP는 1,000 ㎍/㎖에서 ITCH50 값이 약 44%에 이르는 보체계 활성화능을 보였으며, 농도 의존적으로 활성이 증가하는 것을 확인하였다(Fig. 1). 이는 보체계의 강력한 활성인자로 알려져 있는 면역활성 다당체인 구름버섯(Coriolus versicolor, 운지) 유래 PSK(Satio 등 1988)보다는 상대적으로 낮은 활성이나 WGAR-CP가 보체계의 활성인자임을 확인할 수 있었다. 식물유래 다당체에선 천년초(Seo & Shin 2012), 감잎(Jung 등 2002), 고사리(Oh 등 1994) 등의 다당체가 항보체 활성을 가지고 있다고 보고되었다.

Fig. 1. Anti-complementary activities of WGAR-CP. The anti-complementary activity was expressed as the inhibition of 50% total complement hemolysis by Mayer's method. PSK, a known immuno-active polysaccharide from Coriolus versicolor was used as a positive control. The data were expressed as mean±S.D. of three separate experiments. Different corresponding letters indicate significant differences at p<0.05 by Duncan's multiple range test.

3. 산삼 배양근 유래 다당체의 면역세포에 대한 세포독성

면역계 세포인 mouse peritoneal macrophage와 spleen cell에 대한 WGAR-CP의 독성을 확인하였다. WGAR-CP를 0.1~100 ㎍/㎖의 농도로 peritoneal macrophage와 spleen cell에 처리한 후 세포의 생존율을 측정하였다. Peritoneal macrophage cell에서는 100 ㎍/㎖를 제외한 모든 농도에서 유의적인 세포사멸이 나타나지 않아 세포독성이 낮음을 확인할 수 있었고, spleen cell에서는 모든 농도에서 세포독성을 나타내지 않았다(Fig. 2). 특히 spleen cell의 경우, 1 ㎍/㎖의 농도에서 유의적인 세포 증식을 확인할 수 있었다. 일반적으로 식품 유래 다당체의 경우, 면역계 세포에 대해 독성을 나타내지 않는 것으로 알려져 있다. 양조 및 조선간장으로부터 분리한 다당체를 이용한 이전 연구에서도 분리된 다당체가 mouse peritoneal macrophage 및 spleen cell에 대해 세포독성을 나타내지 않았으며, mouse leukaemic monocyte macrophage 유래 RAW 264.7 cell에 대해서는 200 ㎍/㎖ 이상의 농도에서 세포증식 효과를 보인 바 있다(Park 등 2012).

Fig. 2. Cell cytotoxicity of WGAR-CP on mouse peritoneal macrophage (A), and spleen cells (B). All cells were incubated with various concentrations of WGAR-CP for 24 hr (macrophage) and 72 hr (spleen cells). The data were expressed as mean±S.D. of five separate experiments. Different corresponding letters indicate significant differences at p<0.05 by Duncan's multiple range test.

4. Peritoneal macrophage의 nitric oxide 생산에 미치는 산삼 배양근 유래 다당체의 효과

활성화된 macrophage에서 생산되는 NO는 비특이적 숙주 방어 기작인 대식작용(Phagocytosis)을 증대시키고, 세균 및 암세포의 증식 억제 활성을 보여 생체방어기전의 중요한 역할을 한다고 알려져 있다(Sorimachi 등 2001). WGAR-CP 자극에 의한 NO 생성은 저농도에서는 유의적인 활성을 보이지 않았으나, 50, 100 ㎍/㎖에서 농도별로 유의적인 차이를 보였다(Fig. 3). Hong 등(2008)은 산삼 배양근 열수 추출물이 내피 세포에서 농도 의존적으로 NO의 생산을 증가시킨다고 보고하였고, Kim 등(2002)은 홍삼 다당체에 의해 자극된 peritoneal macrophage가 NO 생성을 증가시키고, 증가된 NO에 의해 암세포 사멸도가 유의성 있게 증가함을 밝힌 바 있다.

Fig. 3. Effect of WGAR-CP on NO synthesis in mouse peritoneal macrophage. Peritoneal macrophage cells were treated with various concentrations of WGAR-CP for 24 hr. Supernatants were collected and NO concentration was determined using the Griess reagent. Lipopolysaccharide (LPS: 2 ㎍/㎖) was used as the positive control. The data were expressed as mean±S.D. of five separate experiments. Different corresponding letters indicate significant differences at p<0.05 by Duncan's multiple range test.

5. Peritoneal macrophage의 cytokine(IL-6, IL-12) 생산에 미치는 산삼 배양근 유래 다당체의 효과

Cytokine은 면역세포에서 생성되는 단백질 중재자로 외부 항원에 대한 여러 면역세포간의 협력을 중재하므로, 이들의 생성과 분비는 면역반응조절에 있어서 매우 중요하다. 현재 12가지 이상의 cytokine들이 규명되었으나, 그들의 기능이 모두 밝혀져 있지는 않다. Macrophage가 분비하는 대표적인 면역 유도 사이토카인에는 IL-6, IL-12, TNF-α 등이 있다(Wang 등 2003). 산삼 배양근 유래 활성 다당 WGAR-CP의 자극에 의한 peritoneal macrophage의 cytokine 생산을 ELISA 방법으로 측정한 결과, IL-6, IL-12의 분비를 농도 의존적으로 증가시키는 것으로 확인되었다(Fig. 4). IL-6는 50, 100 ㎍/㎖의 WGAR-CP 농도에서 각각 0.62, 0.94 ng/㎖의 분비능을 보였는데, 저농도에서는 유의적인 차이를 보이지 않았으나, 50, 100 ㎍/㎖의 농도에서는 유의적인 차이를 보였다. 반면, IL-12는 10, 50 ㎍/㎖에서 유의적 차이를 보였으나, 그 이상의 농도에서는 증가를 보이지 않았다. 활성화된 macrophage가 생성하는 IL-12는 T 세포와 natural killer(NK) 세포를 자극시키는데, 이렇게 자극된 T 세포는 IFN-γ를 생성하여 T cell의 helper T cell 1(Th1) 세포응답의 중요한 역할을 한다. 따라서 IL-12에 의한 면역조절은 병원체 및 종양에 대한 세포매개 면역의 중요한 역할을 담당하고 있다(Sundquist 등 2003). Kwon & Chung(2004)은 산삼, 장뇌삼, 인삼의 면역효능 비교연구에서 산삼, 장뇌삼, 인삼이 활성화된 macrophage에서 IL-12의 생성을 촉진하여 Th1 세포응답 활성 물질의 생성을 강하게 증가시킴을 밝힌바 있는데, 산삼 배양근 다당체에 의한 IL-12의 분비 증가는 이러한 연구결과와 일치한다. 초기 염증단계에서 세포 간 신호전달을 수행함으로써 면역반응에 중요한 역할을 담당한다고 알려져 있는 IL-6(Ryu HS 2011) 역시 WGAR-CP에 의해 분비량이 현저히 증가되었는데, Jang & Shin(2010)은 Raw 264.7 macrophage를 이용한 산삼의 면역증강효과 연구에서 IL-1α, IL-1β, IL-6, TNF-α의 생성을 증가시킨다고 밝힌 바 있다.

Fig. 4. Effect of WGAR-CP on induction of IL-6 (A) and IL-12(B) from activated peritoneal macrophages. Peritoneal macrophages were treated with the indicated concentrations of samples for 24 hr. The level of each cytokine in the supernatants of the cultures was determined by ELISA kits. Lipopolysaccharide (LPS: 2 ㎍/㎖) was used as the positive control. The data were expressed as mean±S.D. of five separate experiments. Different corresponding letters indicate significant differences at p<0.05 by Duncan's multiple range test.

Macrophage로부터 분비되는 IL-6, IL-12, TNF-α와 같은 염증성 cytokine들은 NO와 함께 인체에 침입한 병원체 및 종양세포들에 대한 제거활성을 증진시킨다는 이전의 연구결과들을 고려해 보았을 때(Yoon 등 2008), 산삼 배양근 다당체가 macrophage의 NO 및 염증성 cytokine들의 생성을 촉진하여 인체의 면역력을 증진시킬 것으로 사료되었다.

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